人血管內(nèi)皮細(xì)胞

VE 人血管內(nèi)皮細(xì)胞

培養(yǎng)條件：

*培養(yǎng)基：DMEM高糖培養(yǎng)基90%；胎牛血清10%。

培養(yǎng)條件：37.0C carbon dioxide（CO2）,5%

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傳代方法：

收到細(xì)胞后，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

（一）如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶?jī)?nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。

（二）如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細(xì)胞隨即脫落下來(lái)。

3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中。1:3~1:6傳代；2~3天1次。　

。

注意：傳代后一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，，，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造

成生長(zhǎng)不好。

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凍存方法： 凍存液：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　。

儲(chǔ)存：液氮儲(chǔ)存。