黑色素瘤細胞株在適宜條件下無限傳代

　　產品目錄或者細胞說明書上的推薦的培養基一般是黑色素瘤細胞株的原始提供者推薦的培養基或者已經經過驗證的對該黑色素瘤細胞株zui合適的培養基，細胞對未推薦的培養基也許會適應，也有可能不適應。對于更換培養基，應謹慎對待，更換培養基時，應留一瓶細胞使用推薦的培養基培養，留作種子。黑色素瘤細胞株更換培養基有兩種方法，zui簡單的方法是直接更換培養基，強制使細胞適應新的培養基；還有一種更溫和的方法：傳代細胞的時候分成細胞兩瓶，*瓶使用原來推薦的培養基，第二瓶使用50%原來推薦的培養基，50%新的培養基，之后仔細觀察細胞的生長狀態，如果第二瓶細胞生長狀態不好，應立即停止更換培養基，如果第二瓶生長狀態好，黑色素瘤細胞株可以繼續傳代分瓶，一瓶使用50%原來推薦的培養基，50%新的培養基，另一瓶使用25%原來推薦的培養基，75%新的培養基，繼續觀察，如果細胞狀態好，可以全部換成新鮮的培養基。

　　黑色素瘤細胞株的污染鑒定、預防和處理問題。普通微生物污染：培養基渾濁，高倍鏡觀察有微生物污染；按規定棄用并全面嚴格滅菌。支原體污染：顯微鏡無法觀察，依經驗表現為細胞生長緩慢，有細胞漂浮等等，應通過PCR 等方法鑒定，如發現支原體污染，應按規定棄用，實驗室要及時全面消毒滅菌，防止蔓延。（有些常規性細胞學實驗不受支原體污染影響，可以繼續使用細胞傳代，為防污染擴大蔓延，可以選擇性的在培養基中加入價的其它種抗生素，并在隔離實驗室操作和獨立使用一切用具與培養基等）。

　　胞在培養瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續生長，同時也將細胞數量擴大，就必須進行傳代（再培養）。黑色素瘤細胞株傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶（比如胰蛋白酶）消化貼壁細胞成單個細胞，也可加入乙二胺四乙酸（EDTA）提高消化能力，EDTA 是一種二價離子的螯合劑，能抑制細胞膜上的Ca2+和Mg2+。常用的細胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA，一般用不含Ca2+和Mg2+的鹽溶液配置，先用胰酶-EDTA 消化液清洗細胞（5.0 -10.0 ml/75cm），然后棄去消化液，重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(2.0 to 5.0 ml/75 sq. cm flask) ，觀察黑色素瘤細胞株直到細胞變圓脫離瓶壁，此過程一般需要5-15分鐘，為了避免細胞成團，消化細胞的過程中不要拍打細胞瓶。對于特別難消化的細胞，可以加入胰酶EDTA 消化液后把細胞置于37°C 促進消化，細胞脫離瓶壁后，立刻加入含有血清的*培養基中止消化，血清中某些蛋白質能夠抑制胰酶的活性。一般情況下，離心并不需要。如果細胞需要無血清或者低血清的培養基，可以以125000g 轉速離心5分鐘，然后棄去中止用的培養基，加入適合的新的培養基輕輕混勻細胞，移入到新的培養瓶。傳代的比例視細胞類型而定，一般是1:2-1:20，黑色素瘤細胞株具體比例可參考說明書。胰蛋白酶會對某些細胞的細胞膜產生損傷，對于這種類型的細胞，可用細胞刮輕輕刮下細胞，加入適量的培養基，輕輕吹打混勻細胞，然后進行傳代培養。