ATCC細(xì)胞株解凍和培養(yǎng)操作

　　凍存的ATCC細(xì)胞株和雜交腐細(xì)胞株在運(yùn)送過程中使用干冰保持低溫。收到細(xì)胞后，可以立即解凍復(fù)蘇，去除二甲基亞砜（DSMO0）后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。如果不立即復(fù)蘇培養(yǎng)細(xì)胞，必須將細(xì)胞凍存管放置于液氮罐氣相層儲(chǔ)存。請(qǐng)不要將細(xì)胞存儲(chǔ)在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低，達(dá)不到-130℃，細(xì)胞活力會(huì)立即下降。

　　ATCC細(xì)胞株產(chǎn)品附帶一份產(chǎn)品資料單，其中包含細(xì)胞株的信息和詳細(xì)的操作指南。細(xì)胞株的所有詳細(xì)介紹可以在ATCC找到 ，產(chǎn)品資料單也可以在ATCC下載。此外產(chǎn)品還附帶細(xì)胞株具體生產(chǎn)批次的檢測(cè)報(bào)告，其中包含批次的特定信息，如每只凍存管中細(xì)胞的數(shù)量，無微生物污染的檢測(cè)結(jié)果等。

　　操作推薦

　　ATCC推薦在操作凍存的ATCC細(xì)胞株時(shí)使用手套，工作服和防護(hù)面具以避免任何事故發(fā)生。檢查包裝，查看是否有任何事破綻或滲漏。東側(cè)的ATCC細(xì)胞株應(yīng)處于固體狀。

　　將凍存的ATCC細(xì)胞株從有干冰的包裝中取出，理解復(fù)蘇培養(yǎng)，或迅速轉(zhuǎn)移放置在液氧罐氣相層在——130°C以下的度存儲(chǔ)。

　　1、 先準(zhǔn)備好細(xì)胞培養(yǎng)皿或細(xì)胞株培養(yǎng)瓶，及產(chǎn)品說明推薦的相應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)基。并在37°c水浴中預(yù)先溫?zé)峒?xì)胞培養(yǎng)基

　　2、小心取出裝有細(xì)胞的凍存管，保持管蓋擰緊，將凍存管蓋一下的部分置于37°C水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍。解凍過程應(yīng)該盡快，大約短于2分鐘或待zui后一塊小冰晶體剛?cè)诨蛻?yīng)該將細(xì)胞凍存管取出水浴。

　　3、在從水浴中取出的細(xì)胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑，用于菌紙巾或紗布試干。之后的操作步驟都應(yīng)該遵循在無菌條件下生物安全柜中嚴(yán)格操作。

　　4、小心擰干凍存管的頂部，將管內(nèi)容物用1MI移槍轉(zhuǎn)移到9毫升培養(yǎng)基的無菌離心管中。離心5到7分鐘（125*g）.小心吸去上清液以去除抗凍劑（二甲基亞砜），避免丟失細(xì)胞沉淀。將細(xì)胞沉淀重懸于配好的*培養(yǎng)基中。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)容器，輕輕搖晃使細(xì)胞均勻的分布。生長(zhǎng)較慢的細(xì)胞株可重懸于5——8mI培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T125培養(yǎng)瓶。生長(zhǎng)較快的細(xì)胞株可重懸于12——20mI培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T75培養(yǎng)瓶。

　　5、將細(xì)胞培養(yǎng)容器置于細(xì)胞培養(yǎng)箱，在溫度37°C二氧化碳濃度5%的培養(yǎng)條件下進(jìn)行卵育。細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)候后應(yīng)在顯微鏡下觀察細(xì)胞株形態(tài)和生長(zhǎng)狀況 。